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wb背景白前沿信息_wb背景脏(2024年12月实时热点)

内容来源：蜂巢动画所属栏目：教程更新日期：2024-12-01

wb背景白

「SSR交换站超话」 뚢Š𙠢œ𐠥䩥›𝦋›待所普通 – 粉白兔兔背景图分享 ✰ ⊹뚠뚢Š𙠢œ𐠧𔠦源于𐟍 /WB 侵权删 ✰ ⊹뚠뚢Š𙠢œ𐠥𛬧•™𐟍Ž礼拿 ✰ ⊹뚠뚢Š𙠢œ𐨃Œ景展览✰ ⊹뚠뚢Š𙠢œ𐠥ˆ集奶宅妹✰ ⊹뚀

𐟔젨磦žWB实验中的非特异性条带现象 𐟌ˆ 𐟓Š 案例一：无信号的尴尬可能原因：抗体加错、转膜问题等。解决方案：仔细检查抗体，确认转膜无误。经验：若X光片完全无显色，抗体加错可能性大。若有细微条带，可能是蛋白上样量不足或一抗浓度过低。 𐟓Š 案例二：高背景的困扰可能原因：封闭不充分、一抗浓度过高、洗膜时间不足。解决方案：降低一抗浓度，增加洗膜时间。经验：高背景常见于WB中，目的条带清晰但背景弥漫。注意操作规范，洗膜时间不少于5min*5次或10min*3次。 𐟓Š 案例三：非特异性条带的挑战可能原因：一抗非特异性结合。解决方案：更换一抗。经验：非特异性条带多因一抗质量不佳。可利用阴性对照和阳性对照确定目的条带。 𐟓Š 案例四：边缘规则的白圈可能原因：电转中膜与胶之间存在气泡。解决方案：转膜前去除气泡。经验：电转液倒入盘内，高度与滤纸齐平。检查滤纸与胶之间有无气泡，用U型膜接触胶中间，慢慢放下膜。 𐟓Š 案例五：条带中间出现白色（反白）可能原因：中心部位底物消耗过快。解决方案：降低蛋白量，降低一抗和二抗浓度。经验：在底物消耗前定影X光片，或从降低蛋白量和抗体浓度入手。

敦煌壁画VS自画水彩：一次视觉盛宴 𐟌Ÿ（所有原图来自于wb莫高窟）𐟌Ÿ 𐟒›图一上面是壁画，下面是自画我的色调比壁画要鲜艳，还加了些自创的纹饰，比如圆形内的白色勾勒和背景图里的小花纹（用时约30小时） 𐟒š图二上面是壁画，下面是自画水彩颜色有大幅改动，用白色勾边（用时约50小时） 𐟒›图三中间图像改动较大，加入了一点禅绕画法（用时约30小时） 𐟒™𐟒š图四人物画得略小（对不起，水平有限，每次都画得不像）（用时约40小时） 𐟒œ图五，六左边是壁画，右边是自画速涂，铅笔打草稿，不用针管笔勾边，直接涂色很快，每张图用时约30分钟 𐟒š图七左边是壁画，右边是自画水月观音背景，用湿画法，把纸涂湿，直接用多种颜色水彩晕染，最后白色勾边（整张画用时约8小时） 𐟒›图八左边是壁画，右边是自画颜色完全不一样，多了很多白色勾边（用时约10小时） 𐟒™图九左边是壁画，右边是自画构图比原图大，颜色比原图鲜艳，加了白色勾边（用时约8小时） 𐟒›𐟒™工具水彩颜料：俄罗斯白夜学生级、鲁本斯马卡龙色辅助颜料：国画颜料、通派金粉、白色高光纸张：宝虹水彩纸300g 水彩笔：秋宏斋、蒲公英底稿：自动笔、橡皮、针管笔勾边（樱花牌0.1） ❤𐟒š𐟒™𐟒›𐟒œ 我是一个很没用耐心的人，所以这些画很粗糙。我努力克制自己，我的画和我本人一样粗糙，那种做自己的粗糙且快乐。我会继续画下去的~ 拜拜~

如何用ImageJ处理WB条带数据 𐟓Š 嘿，大家好！今天我想跟你们分享一下如何用ImageJ软件来处理WB条带数据。这个过程其实挺有意思的，特别是对于那些刚开始接触生物实验的小伙伴们。下面我会一步步详细讲解，希望对你们有帮助！第一步：下载和安装ImageJ 𐟓助斥…ˆ，你得先下载并安装ImageJ软件。这个软件是开源的，下载地址可以在网上找到。安装完成后，打开它。第二步：导入WB条带图片 𐟖𜯸 接下来，导入你的WB条带图片。点击File菜单，选择Open，然后选择你存放图片的文件夹，找到你的WB条带图片并选中它。第三步：转换为灰度图片 𐟌‘ 为了让背景更清晰，我们需要把图片转换成灰度模式。点击Image菜单，选择Type，然后选择8-bit。这样图片就会变成灰度模式。第四步：消除背景干扰 𐟧𙊥›𞧉‡的背景可能会影响后续的分析，所以我们需要消除它。点击Process菜单，选择Subtract Background。在弹出的对话框中，输入50（这个数值可以根据具体情况调整），然后勾选Light background，点击OK。这样背景就会变得更白一些。第五步：设置定量参数 𐟓 现在我们需要设置一些定量参数。点击Analyze菜单，选择Set Measurements。在弹出的对话框中，勾选Area、Mean gray value、Min & max gray value、Integrated density。这些参数将帮助我们后续分析数据。第六步：设置单位 𐟓 在分析之前，我们需要设置单位。点击Analyze菜单，选择Set Scale。在弹出的对话框中，将“Unit of length”设置为“pixels”，其他的不用改动。第七步：转换为亮带 𐟌Ÿ 为了更清楚地看到条带，我们需要将图片转换为亮带模式。点击Edit菜单，选择Invert。这样条带就会显示为亮色。第八步：选择不规则圆圈 𐟪™ 接下来，选择菜单栏中的一系列不规则圆圈，根据情况选择一种。然后将圆圈手动拉到第一条带，尽量将条带都圈起来。第九步：测量灰度值 𐟓Š 点击Analyze菜单下拉出现的measurement，即可弹出你选定区域的灰度统计值。你也可以直接按快捷键（英文状态下的键盘m）来获取这些值。第十步：移动不规则圆圈 𐟔„ 手动移动不规则圆圈至下一条条带，重复8、9步骤，直至所有条带都被测量。这个过程可能需要一点耐心，但值得的！第十一步：导出数据到Excel 𐟓ˆ 当你测量完所有条带后，选择结果中的“Edit”的“Select All”，然后复制数据“IntDen”到Excel表即可进行分析。你也可以直接在Results对话框中，选择File → Save as，直接导出excel表格。好了，这就是用ImageJ处理WB条带数据的全部步骤啦！希望对你们有帮助。如果有任何问题，欢迎在评论区留言哦！𐟘Š

WB实验封闭技巧：如何选择合适的封闭液？在上一篇文章中，我们讨论了如何在WB实验中进行湿转，今天我们来聊聊封闭这一关键步骤。封闭的目的是为了防止一抗的非特异性结合，从而避免产生非特异条带或背景杂乱。封闭液的选择 𐟧ꊊ选择正确的封闭液可以促进抗原抗体更好地结合。你可以通过抗体说明书来确定是否有特殊的封闭方法，或者根据实验结果进行调整。以下是两种常见的封闭液及其优缺点：脱脂奶粉 𐟥› 脱脂奶粉含有多种蛋白，封闭效果全面。它是最常用的封闭液之一（浓度2.5-5% w/v），经济实惠。然而，由于含有少量残留的生物素和碱性磷酸酶（AP），它不适用于生物素标记和AP标记的抗体系统。此外，脱脂奶粉中含有酪蛋白，这是一种磷酸化蛋白，会导致抗体的非特异性结合，使条带背景变脏，因此不适合用于磷酸化蛋白的检测。牛血清白蛋白 (BSA) 𐟐‚ 对于磷酸化蛋白的检测，推荐使用BSA（浓度2-5 % w/v）。与脱脂奶粉相比，BSA更适用于磷酸化蛋白的检测。需要注意的是，普通级别的BSA可能含有IgG或其他血清蛋白，这些蛋白会与哺乳动物抗体（如抗牛、山羊、绵羊、马等二抗）产生交叉反应，增加非特异性背景信号。因此，建议使用不含IgG的BSA产品。相对于脱脂奶粉，BSA不含生物素，对于生物素标记的抗体系统而言，可能是最好的选择。通过选择合适的封闭液，你可以有效避免非特异性结合，从而提高WB实验的准确性和可靠性。希望这些信息对你有所帮助！

WB转膜必知的10个关键点，不看后悔！ WB转膜的十大注意事项⬇️ 1⃣️ 膜转反了𐟑‰ 转膜时记住“黑胶白膜”，即黑色部分对应膜，白色部分对应胶。 2⃣️ 膜上有气泡𐟑‰ 滤纸要充分浸湿，盖上滤纸后用左手轻压，右手用切胶板轻刮排掉气泡，冰浴转膜。 3⃣️ PVDF膜准备不足𐟑‰ PVDF膜具有疏水性，先在甲醇中浸泡激活3分钟，再用超纯水洗10秒，最后放到新配的转膜液中平衡1分钟再进行转膜。 4⃣️ 转膜后分不清蛋白面𐟑‰ 转膜前用剪刀在膜的右上角切掉一部分做标记，或者用圆珠笔在蛋白面（紧贴着胶的那一面）做标记区分，一侧1孔加marker一侧两孔加marker（有预算可以选择）。 5⃣️ 滤纸选择困难𐟑‰ 薄滤纸（1cm以下）可以一侧垫两张，厚滤纸一侧垫一张即可，根据转膜次数增多滤纸会变薄，需考虑更换会增加滤纸数量。 6⃣️ 转膜液保存不当𐟑‰ 10*转膜液需保存在4度冰箱，1*转膜液不可以长期保存，最好不要回收使用，否则影响转膜效率。 7⃣️ 显影后膜很脏𐟑‰ 避免手直接接触膜，使用镊子夹膜的marker部分，全程手套，手上的油脂等会影响转膜效率产生背景污斑。 8⃣️ 裁剪的膜和滤纸不合适𐟑‰ 如果膜裁切过大，会导致电流不能均匀通过膜，影响转膜并且浪费；如果膜裁切过小则影响实验。 9⃣️ 切胶不当𐟑‰ 切胶时注意切胶板垂直向下切胶，保证胶面整齐防止裂开。 𐟔Ÿ 冰浴很重要𐟑‰ 有条件尽量用冰块事先填满转膜电泳槽四周，以预先降低温度，没有条件可以用冰袋和水代替（不是非常推荐）。 ❤️ 下期预告：WB相关溶液的配制（转膜液、电泳液等）

𐟔젗B实验常见问题解答集锦一. 𐟏… 电泳常见问题电泳条带扭曲：可能是电泳槽内部电泳液未加满或漏液，及时加满电泳液可使条带变直。电泳条带拖尾：样本溶解不均匀可能导致拖尾，确保样本溶解后再上样。电泳条带扩散：加样量过多会导致条带扩散，适当减少上样量可改善。溴酚蓝呈笑脸状：泳道底部中间高、两边低，可能是制胶试剂温度高或制胶后未及时保湿，导致胶不均匀冷切。可降低电压，缓慢电泳，或在冰浴条件下进行。二. 𐟔„ 电转常见问题膜转反：注意“黑胶红膜”原则，即转膜夹黑色部分对应胶，红色部分对应膜。转膜夹放置错误：确保转膜夹红色对红色，黑色对黑色。背景有气泡：转膜过程中气泡会导致不均匀的白色斑点，转膜时要仔细检查，避免气泡产生。三. 𐟔’ 封闭常见问题背景脏：封闭不充分可能导致背景脏，可延长封闭时间或更换封闭液。条带有黑色斑点：封闭液未完全溶解会导致黑色斑点，封闭液需充分摇匀。条带信号弱：过度封闭可能使信号弱，可适当降低封闭液浓度或更换封闭液。封闭时间过长：封闭时间过长可能影响抗原抗体结合，建议封闭时间为常温1-2小时，并减少封闭液中的蛋白浓度。膜上有黑点和黑斑：可能是膜上其他部位与一抗或二抗非特异性结合，封闭液需完全溶解并混匀，选择纯牛奶作为封闭液，封闭后彻底清洗。非均一性背景：膜可能过干导致非均一性背景，操作过程中注意保持膜湿润。非特异性条带：封闭不彻底可能导致非特异性条带，重新调整封闭条件，选择适合的封闭液，适当提高封闭物浓度，延长封闭时间。抗体与封闭试剂反应：使用前过滤封闭试剂可避免此问题。四. 𐟐 孵一抗二抗常见问题蛋白条带信号弱：抗体孵育不完全可能导致信号弱，增加抗体浓度和延长孵育时间可改善。背景有白色斑点：抗体孵育不均匀可能导致不均匀的白色斑点，孵育抗体时使用摇床可避免此问题。

WB实验背景太黑？试试这些方法吧！大家好，我最近在做磷酸化蛋白的WB实验，结果发现背景特别黑，条带倒是有一点，但几乎看不清。我用的是CST的抗体，稀释比例是1:1000，封闭用的是回收过的5%BSA，封闭了3小时，洗膜洗了三次，每次10分钟。有没有大神知道这是怎么回事？有没有什么办法能改善一下？ #wb实验 #磷酸化蛋白 #背景太黑

WB实验全攻略：从零开始到成功曝光在WB实验领域摸爬滚打了四年，我积累了不少心得。从细胞培养的第一步到最后的化学发光成像，每一个细节都至关重要。两天的辛勤工作，往往在曝光的瞬间决定成败。下面是我总结的一些关键步骤，希望能帮到你们。电转：关键的一步 𐟔犦🀦𔻐VDF膜：PVDF膜需要在甲醇和4度中激活30分钟。电泳后处理：电泳结束后，取出胶板，短玻璃板朝上放置。揭开短玻璃板后切除多余的胶，在水中将胶从长玻璃板上取下。转膜：在电转液中，转膜夹黑色面朝下，依次放置石棉网-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-石棉网，夹紧转膜夹，注意PVDF膜要与胶贴合，排走气泡。调整转膜夹黑色界面转向转膜槽负极，白色面朝向转膜槽正极。灌满电转液后，用200mA恒定电流转膜120分钟（具体条件自行探索），转膜槽外周装满冰块。封闭：去除背景的关键 𐟐„ 转移膜：将膜取出后，应观察到marker完全从胶转移至膜上。清洗：用TBST快速清洗掉膜上残留的电转液。封闭：将PVDF膜浸泡在5%封闭牛奶中，缓慢摇荡，室温孵育1小时。抗体孵育和化学发光成像：让蛋白可视化 𐟌Ÿ 一抗孵育：封闭结束后，用1㗔BST缓冲液洗掉多余的牛奶，洗膜每次5分钟，共3次。一抗使用一抗稀释液或TBST按照1：5000稀释（具体条件自行摸索），然后将膜浸泡在一抗中，于4℃冰箱中摇床孵育过夜。二抗孵育：一抗孵育后并回收，加入1㗔BST缓冲液放置于摇床上快摇5分钟，共3次。使用5%脱脂牛奶按照1:1000稀释二抗，室温慢摇1小时。化学发光成像：二抗孵育完毕后，回收二抗，1㗔BST快洗5分钟，共3次。洗膜结束后，将发光液敷在膜上，通过化学发光成像仪曝光，采集并使用ImageJ分析灰度。希望这些步骤能帮到你们，祝大家实验顺利！𐟒ꀀ

10分钟封闭液！WB新体验今天给大家介绍一种在分子生物学中常用的技术——Western Blot (WB)，它主要用于检测特定蛋白在样本中的存在与表达水平。封闭液在这里起到了至关重要的作用，它能阻止一抗和二抗的非特异性结合，从而减少背景噪音、提高信号对比度。没有适当的封闭，即便是最精细的实验设计也可能因高背景信号而受到影响，导致数据解读困难。快速封闭液的介绍 𐟚€ 快速封闭液是一种无蛋白成分的即用型封闭液，适用于高效快速的封闭转膜后的NC或PVDF膜。它可以在10分钟内完成封闭过程，无需洗涤，直接孵育一抗。这种封闭液的效果显著优于传统的基于牛血清白蛋白、脱脂奶粉、酪蛋白等的封闭液及国外同类产品。传统封闭液的缺点 𐟧 传统的封闭液如脱脂奶粉、BSA等，虽然在一些实验中也能起到一定的封闭效果，但它们通常需要较长的封闭时间，并且需要进行洗涤，操作相对繁琐。相比之下，快速封闭液不仅操作简便，而且效果更佳，能够显著提高实验效率。适用范围广泛 𐟌 快速封闭液适用于常规抗体、磷酸化抗体、生物素标记抗体等多种抗体，通用于各种Western Blot实验。无论你是新手还是老手，这款封闭液都能为你带来便利和高效。希望这些信息对你有所帮助，快去试试吧！如果觉得有用，记得点赞收藏哦！

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