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碱基分离背景权威发布_碱基分离背景分析(2024年12月精准访谈)

内容来源：蜂巢动画所属栏目：观点更新日期：2024-12-01

碱基分离背景

溴化乙锭染色技巧：从凝胶到结果溴化乙锭（Ethidium bromide, EB）是一种广泛用于DNA和RNA检测的染料。它通过插入双螺旋的碱基对之间，显示出强烈的荧光信号。EB在300和360nm处有最大UV吸收，在590nm处有最大发射红橙信号。此外，EB还显示出了对雌激素受体与DNA相互作用的影响。 𐟔젦𚴥Œ–乙锭染色的优点高敏感性：能够检测到1-5 ng/band的DNA。低背景：产生清晰的条带。简单性：染料可以直接加入凝胶中，无需单独染色/脱色步骤。非破坏性：不会破坏DNA结构。 ⚠️ 注意事项溴化乙锭是一种强诱变剂，处理时需戴手套和采取适当预防措施。废弃物处理：由于溴化乙锭的毒性，处理废弃物时需特别注意。 𐟓 方法一：凝胶和缓冲液中加入溴化乙锭凝胶制备：将琼脂糖溶解在缓冲液中，冷却至60-70Ⰳ后，加入EB至0.5 ⵧ/ml的最终浓度。缓冲液准备：在缓冲液中加入5⵬/100ml的EB原液。运行凝胶：完成后，将凝胶置于UV灯箱上的保鲜膜中，条带在微弱的橙色背景上显示为亮橙色。 𐟓 方法二：运行后染色染色溶液准备：在水中或缓冲液中准备0.5ⵧ/ml的EB溶液，避光保存。染色：将运行后的凝胶浸入染色溶液中15-30分钟，然后放在UV灯箱上的保鲜膜上观察。 𐟓Œ 注意事项灵敏度：与方法一相同，可能需要在水中或1 mM MgSO4中脱色以达到最佳灵敏度。背景区域：由于EB的正电荷，会有高背景区域，但这些区域足以满足多种用途。通过以上方法，溴化乙锭为DNA和RNA检测提供了高效、敏感的染色方案。在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的方法，并注意安全处理废弃物。

CRISPR-Cas9原理与操作全解析 𐟔 CRISPR-Cas9系统的背景 CRISPR是一种在细菌和古菌中发现的基因组序列，这些微生物利用它来抵御病毒的侵袭。Cas9则是一种与CRISPR系统配对的蛋白质，专门负责切割DNA。 𐟔砃RISPR-Cas9的工作原理识别靶位点：细菌的CRISPR基因组包含一系列重复的短序列和间隔序列。这些间隔序列来自过去感染过的病毒DNA，作为记忆来识别和对抗重复的病毒。 crRNA引导：成熟的crRNA与Cas9蛋白结合，形成CRISPR-Cas9复合体。crRNA中的间隔序列与靶DNA序列进行配对识别。靶向结合与切割：CRISPR-Cas9复合体中的crRNA与靶DNA上的相应序列通过碱基配对结合。此时，Cas9蛋白定位于靶DNA区域。Cas9蛋白具有两个切割酶域，分别负责在靶DNA的两个链上产生双链断裂。这种双链断裂在目标位置上产生切口，破坏目标基因的正常功能。 𐟓 操作步骤准备CRISPR-Cas9复合体：将成熟的crRNA与Cas9蛋白结合，形成复合体。识别靶位点：复合体中的crRNA与靶DNA上的相应序列进行配对识别。切割DNA：Cas9蛋白在靶DNA的两个链上产生双链断裂。修复与筛选：通过修复机制筛选出被切割的DNA片段，从而实现基因编辑。通过以上步骤，CRISPR-Cas9系统能够在基因组水平上进行精确的切割和编辑，为生物医学研究和基因治疗提供了强有力的工具。

高中生物必修一知识点全解析 𐟓š 首先，明确一点，这套资料是补充材料，适合学有余力的同学进行拓展，千万不要本末倒置哦！ DNA复制、转录和翻译的方向问题 DNA复制、转录和翻译的方向问题常常让人混淆。解决这个问题的方法是查看核苷的结构，每个C的位置都标注得很清楚。对照结构再对照具体方向，很快就能搞清楚。下次我会发视频详细讲解。 cAMP作为第二信使 cAMP作为第二信使在激素调节中起到关键作用。激素调节主要有两种方式：第二信使假说和基因表达学说。第二信使假说中的第二信使就是环化核苷酸。 RNA的稀有碱基 RNA的稀有碱基又称修饰碱基，虽然在核酸分子中含量较少，但它们是天然存在的，不是人工合成的。这些碱基在转录后经过甲基化、乙酰化、氢化、氟化和硫化形成。磷酸二酯键的形成形成磷酸二酯键的过程不直接产生水，这是一个反常规的知识点，需要重点记忆。酶的抑制剂酶的可逆性抑制剂和不可逆抑制剂可以通过动画演示来理解，结合动画讲解会更容易掌握。脂质的分类和结构脂质这一节需要先搞清楚脂质的分类和结构。LDL和HDL是常出现的题干背景。糖代谢和脂肪代谢糖代谢和脂肪代谢是生物化学的重点章节。想要了解的同学可以多搜索一些专门的生化博主进行学习。学习建议昨天有同学问我暑假该怎么进行生物学习，他是南京头部高中的高一学生，生物从期中69分到期末85分。他的问题是容易钻牛角尖，做题速度把握不好，容易轻敌，审题漏条件。我的建议如下：重新学习必修二的抽象概念，用题目带着看书，练习册推荐小题KL。所有的练习必须计时，类考试或者就是考试，体会不同的题量，如何分配做题时间。不一定要上课，但生物学习的时间要固定，比如每周一周四下午的14:00-16:00，就是铁打不动的生物学习时间。

微生物学备考攻略：从基础到进阶微生物与免疫这部分内容在预防科目的重要性不言而喻。想要彻底掌握这部分内容，建议大家跟着黄祈云的备考思路来：以背诵为主，刷题巩固为辅。免疫技术则需要多刷题，了解出题思路。以下是我总结的一些备考口诀，大家可以参考一下！细菌的结构与生理 𐟧슧𛆨Œ形态：细菌是单细胞原核细胞型微生物，有细胞壁和核质，但没有成形的细胞核和完整的细胞器。它们以微米为单位进行测量，在固体培养基上培养时，肉眼可以看到菌体集落。 G+菌与G-菌：革兰氏染色法可以将细菌分为紫色（G+菌）和红色（G-菌）。细胞壁功能：维持细菌固有形态、进行物质交换、携带有抗原决定簇与致病性有关。细菌特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢。细菌染色方法：革兰氏染色法：草酸铵结晶紫染色1分钟→碘液染1分钟→95%酒精脱色30秒→碳酸复红1分钟。瑞氏染色法：将细菌染成蓝色，组织细胞的细胞核染成蓝色，背景和细胞浆染成红色。抗酸染色法：常用于结核杆菌和副结核杆菌的染色，染成红色。细菌的感染 𐟦 正常菌体分布：口腔：球菌、乳杆菌、棒状杆菌。胃：乳杆菌、幽门螺杆菌。反刍前胃：无芽孢厌氧菌。大肠：双歧杆菌、拟杆菌、肠球菌、大肠杆菌、乳杆菌。鼻、咽：葡萄酒球菌。喉、扁桃体：甲型链球菌、卡他球菌。阴道：乳杆菌。正常菌群的生理作用：生物颉颃作用、营养作用、免疫作用。细菌感染的诊断 𐟔슦Š—体检测：最好检测急性期和恢复期双份血清样本，后者为前者4倍以上才具诊断价值。聚合酶链式反应（PCR）：需要DNA模板、引物、耐热DNA聚合酶、脱氧核苷酸。核酸杂交技术：利用DNA双螺旋分子的碱基互补原理进行设计。利用生化反应对肠道杆菌进行鉴定是必不可少的。消毒与灭菌 𐟧𜊦𖈦𘎧�Œ的区别：消毒指杀灭病原微生物，但不一定能杀死芽孢；灭菌指杀灭病原微生物、非病原微生物及其芽孢。高压蒸汽灭菌法：应用最广、灭菌效果最好的方法。煮沸法：100℃时5分钟可杀死细菌的繁殖体，1-3小时杀死芽孢，加入2%碳酸钠则沸点升至少105℃。流通蒸汽法：100℃ 30分钟可杀死细菌的繁殖体，但不可杀死芽孢。巴氏消毒法：主要用于食品消毒，65℃维持30分钟。希望这些内容能帮助大家更好地备考，加油！𐟒ꀀ